【DPPH自由基清除实验教学】在现代生物化学与食品科学的研究中，自由基的清除能力已成为评估抗氧化物质活性的重要指标之一。其中，DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）自由基清除实验是一种常用且简便的方法，广泛应用于植物提取物、天然产物及食品添加剂的抗氧化性能评价中。本文将围绕“DPPH自由基清除实验教学”展开，详细讲解其实验原理、操作步骤以及教学过程中需要注意的关键点。

一、实验原理

DPPH是一种稳定的有机自由基，其在可见光区（约517 nm）具有较强的吸收峰。当加入具有还原能力的抗氧化物质时，这些物质会与DPPH自由基发生反应，使其从深紫色转变为无色或浅黄色，从而引起吸光度的下降。通过测定吸光度的变化，可以计算出样品对DPPH自由基的清除率，进而评估其抗氧化能力。

二、实验材料与仪器

- DPPH溶液（浓度通常为0.1 mM）

- 样品溶液（如不同浓度的茶多酚、维生素C等）

- 磷酸盐缓冲液（pH 7.4）

- 分光光度计

- 移液枪、比色皿、烧杯、量筒等实验器材

三、实验步骤

1. 准备标准曲线

配制一系列不同浓度的DPPH溶液，并在517 nm波长下测定其吸光度，绘制标准曲线，用于后续样品测定。

2. 样品处理

将待测样品用磷酸盐缓冲液稀释至不同浓度，备用。

3. 反应体系建立

在试管中依次加入一定体积的DPPH溶液和不同浓度的样品溶液，充分混匀后静置一定时间（一般为30分钟），使反应充分进行。

4. 测定吸光度

使用分光光度计在517 nm波长下测定各组样品的吸光度值。

5. 计算清除率

清除率计算公式如下：

$$

\text{清除率} = \left(1 - \frac{A_{\text{样品}}}{A_{\text{对照}}}\right) \times 100\%

$$

其中，$ A_{\text{样品}} $ 为加样后的吸光度，$ A_{\text{对照}} $ 为未加样品时的吸光度。

四、教学要点与注意事项

1. 实验条件控制

实验过程中应严格控制温度、时间及试剂浓度，避免因环境因素导致数据偏差。

2. 重复性与准确性

每个浓度至少做三个平行实验，确保结果的可靠性和可重复性。

3. 安全防护

DPPH溶液具有一定的毒性，操作时需佩戴手套和护目镜，避免接触皮肤和眼睛。

4. 数据分析与解释

教学中应引导学生理解实验数据背后的意义，例如如何根据清除率判断样品的抗氧化能力，并结合实际应用场景进行分析。

五、实验意义与拓展

通过本实验，学生不仅能够掌握DPPH自由基清除实验的基本操作方法，还能深入理解抗氧化机制及其在食品、医药等领域的应用价值。此外，教师可鼓励学生设计对比实验，探究不同成分或浓度对清除效果的影响，提升其科研思维与实践能力。

结语

DPPH自由基清除实验作为一项基础而重要的实验技术，在教学中具有广泛的适用性和教育意义。通过系统的教学设计与严谨的操作指导，能够有效培养学生的实验技能与科学素养，为今后的科研工作打下坚实的基础。